Ключевые моменты статьи
- Подготовка спермы — это комплекс процедур, направленных на отбор самых жизнеспособных и подвижных сперматозоидов для использования в ВРТ.
- Различные методы подготовки, такие как swim-up, центрифугирование и MACS, позволяют улучшить качество спермы и повысить вероятность оплодотворения.
- Выбор конкретного метода подготовки спермы зависит от индивидуальных особенностей пациента и целей программы ВРТ.
По оценкам, примерно 15% супружеских пар обращаются за помощью для преодоления проблем бесплодия. Мужской фактор является причиной проблем с бесплодием у одной трети пар. Оставшиеся две трети, по-видимому, равномерно распределены между проблемами, связанными с женским фактором, и смесью необъяснимых причин и комбинаций мужского и женского факторов, соответственно.
Приблизительно 2-4% родов связаны с использованием вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). При использовании ВРТ образцы спермы сначала должны быть обработаны, прежде чем их можно будет использовать. В частности, методы подготовки спермы направлены на воспроизведение in vitro естественного процесса, в ходе которого жизнеспособные сперматозоиды отделяются от других компонентов эякулята, поскольку они активно мигрируют через цервикальную слизь. При лабораторной обработке жизнеспособные сперматозоиды сначала отделяются от других компонентов эякулята как можно раньше.
Для отбора сперматозоидов существуют различные методы разделения или изоляции сперматозоидов. Традиционные методы, такие как метод простой промывки, градиентное центрифугирование по плотности (ГЦП), методы "плавание вверх", "плавание вниз" и фильтрация стеклянной ватой, отбирают сперматозоиды на основе их подвижности и морфологии. Однако важные факторы, влияющие на потенциал оплодотворения сперматозоидов, такие как окислительный стресс и целостность ДНК, не могут быть оценены ни одним из этих традиционных методов. Поэтому было разработано несколько современных методов отбора сперматозоидов, позволяющих отобрать сперматозоиды с высокой целостностью ДНК для повышения успешности ВРТ. В настоящее время для этой цели используется несколько таких методов, каждый из которых опирается на различные характеристики для отбора оптимальных сперматозоидов.
Физиологическая интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида
Эта методика основана на том, что гиалуроновая кислота (ГК) играет важную роль в отборе функционально компетентных сперматозоидов при оплодотворении in vivo. ГК является не только основным компонентом кумулюсного матрикса, который окружает человеческий ооцит, но и естественным селектором зрелых сперматозоидов. В настоящее время существует два варианта проведения данной методики: либо использование пластиковой культуральной посуды с микроточками гидрогеля НА, либо использование альтернативной вязкой среды, содержащей НА, известной как «Sperm Slow».
Магнитно-активационная сортировка клеток
Повреждение ДНК сперматозоидов может стать причиной мужского бесплодия и привести к апоптозу сперматозоидов. Апоптоз в сперме проявляется воздействием фосфатидилсерина, что позволяет обнаружить и отделить апоптотические сперматозоиды. Такие сперматозоиды невооруженным глазом не отличить от нормальных. Чтобы избежать поврежденных сперматозоидов, мы используем систему. Перед разделением поврежденные апоптотические сперматозоиды маркируются магнитными наночастицами, затем они проходят через колонку, где апоптотические сперматозоиды улавливаются. Неповрежденные живые сперматозоиды проходят через колонку и собираются для дальнейшего использования. К случаям, в которых обычно применяется этот метод, относятся: пациенты с измененными параметрами спермы, криоконсервированные сперматозоиды, извлеченные из ранее замороженных образцов спермы, предыдущие неудачи оплодотворения, повторяющиеся неудачи имплантации и повторяющиеся выкидыши.
Техника, основанная на микроскопии - интрацитоплазматическая морфологически отобранная инъекция (ИЦМОИ)
Исследования показали, что сперматозоиды, классифицируемые как морфологически «нормальные» при обычном оптическом разрешении и увеличении (x200-x400), могут иметь ультраструктурные дефекты. Многие из этих аномалий были связаны со скрытыми хромосомными дефектами, высоким уровнем фрагментации ДНК, аномальной функцией центриолей и т. д. Эти аберрации могут препятствовать оплодотворению, приводить к постфертилизационному аресту или даже нарушать развитие эмбриона. Чтобы преодолеть вышеупомянутые дефекты, наблюдения можно проводить с помощью инвертированного светового микроскопа с мощной оптикой, предназначенного, при увеличении x6000-x6600, что позволяет эмбриологу оценить морфологию сперматозоидов в режиме реального времени. В этом отношении ИЦМОИ оказался полезным для пациентов с тяжелой олиго-астено-тератозооспермией (мужчины с низким количеством, низкой подвижностью и повышенным количеством аномальных форм в образцах спермы) и для пар с повторяющимися неудачами имплантации или повторными выкидышами (частота выкидышей может быть снижена до 50%), когда присутствует явный тяжелый фактор сперматогенеза.
Таким образом, существует несколько методов подготовки спермы для использования в ВРТ. Каждая бесплодная пара должна быть тщательно обследована, чтобы определить наилучший метод подготовки спермы. Клиника ЭКО несет ответственность за отбор подходящих случаев, которым будут полезны эти методы, поскольку их рутинное использование во всех случаях может привести к неблагоприятному исходу.
Мнение эксперта
